Plasmide CRISPR d'Activation (h) Histone Deacetylase 1 (HDAC1): sc-400203-ACT

HDAC1 code l’histone désacétylase 1, une désacétylase de lysine de classe I qui retire des groupes acétyle des queues d’histones afin de compacter la chromatine et de moduler l’activité transcriptionnelle. En tant que composant catalytique central des complexes répresseurs Sin3, NuRD et CoREST, HDAC1 coordonne la régulation épigénétique de la progression du cycle cellulaire, de la signalisation des dommages à l’ADN, des programmes de différenciation et du remodelage de la chromatine. L’activité de HDAC1 influence la stabilité du génome via ses effets sur le timing de réplication, le recrutement des facteurs de réparation et la répression transcriptionnelle au niveau de loci sensibles. Une expression dérégulée de HDAC1 ou une activité anormale de ses complexes est fréquemment associée à des états transcriptionnels altérés en cancérologie, à des phénotypes de neurodéveloppement et à des contextes de signalisation inflammatoire, ce qui en fait une cible couramment utilisée pour la dissection des voies.

Histone Deacetylase 1 (HDAC1) Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HDAC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Histone Deacetylase 1 (HDAC1) Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HDAC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HDAC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Histone Deacetylase 1 (HDAC1). Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HDAC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Histone Deacetylase 1 (HDAC1) au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Histone Deacetylase 1 (HDAC1) dans les cellules tumorales présentant une expression de HDAC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.