Plasmide CRISPR/Cas9 KO Histone cluster 1 H1E (h): sc-402775

Présentation

HIST1H1E code l’histone de cluster 1 H1E, une variante de l’histone H1 de liaison (linker) dépendante de la réplication, qui se fixe à l’ADN nucléosomique afin de stabiliser la structure de la chromatine d’ordre supérieur et d’influencer la compaction du génome. En modulant l’accessibilité de la chromatine, H1E contribue à réguler les programmes transcriptionnels, le calendrier de réplication de l’ADN et les réponses aux dommages de l’ADN, via des effets sur le remodelage de la chromatine et le recrutement des facteurs de réparation. Des modifications de la stœchiométrie de la famille H1 et de la dynamique des histones de liaison ont été associées à une dérégulation épigénétique observée dans le cancer et les troubles du neurodéveloppement, et des perturbations liées à HIST1H1E peuvent affecter les décisions de destinée cellulaire et la stabilité génomique. En tant que composant du locus Histone cluster 1, HIST1H1E est également pertinent pour les études portant sur l’expression des histones couplée à la phase S et l’assemblage de la chromatine.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Histone cluster 1 H1E (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HIST1H1E dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HIST1H1E, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HIST1H1E à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Histone cluster 1 H1E.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HIST1H1E pour l'étude de la signalisation de Histone cluster 1 H1E, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HIST1H1E essentiels à la fonction de Histone cluster 1 H1E
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HIST1H1E pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Histone cluster 1 H1E plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Histone cluster 1 H1E plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HIST1H1E. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Histone cluster 1 H1E plasmide HDR (h) et le Histone cluster 1 H1E (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HIST1H1E pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HIST1H1E définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.