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Histone cluster 1 H1ECRISPR激活质粒(h) | sc-402775-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
Histone cluster 1 H1ECRISPR激活质粒(h2) | sc-402775-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
HIST1H1E 编码组蛋白簇 1 H1E(histone cluster 1 H1E),属于连接组蛋白 H1 家族成员,可在核小体 DNA 的进入/退出位点结合,从而促进更高阶染色质压缩并调控基因组可及性。通过影响核小体间距与染色质纤维的组织方式,H1E 参与转录调控、DNA 复制时序以及 DNA 损伤应答信号传导。H1 的化学计量比例变化及与 H1E 相关的染色质状态,常在表观遗传重编程、分化和基因组稳定性的研究中被关注;这些过程在癌症和神经发育障碍中也常受到扰动。作为一种染色质结构蛋白,H1E 亦与复制压力、异染色质形成以及全基因组范围内转录因子占位等研究方向相关。
Histone cluster 1 H1E CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性HIST1H1E的表达。
Histone cluster 1 H1E CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的HIST1H1E基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于HIST1H1E转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Histone cluster 1 H1E表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的HIST1H1E位点,并能够研究内源性位点上依赖于Histone cluster 1 H1E的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在HIST1H1E表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Histone cluster 1 H1E通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。