Histone cluster 1 H1E CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402775-ACT

HIST1H1E kodiert Histon-Cluster 1 H1E, ein Linker-Histon der H1-Familie, das an die nukleosomale DNA an den Ein- und Austrittsstellen bindet, um eine höherstufige Chromatinkompaktion zu fördern und die Zugänglichkeit des Genoms zu regulieren. Indem H1E den Abstand zwischen Nukleosomen und die Organisation der Chromatinfaser beeinflusst, trägt es zur transkriptionellen Kontrolle, zum Timing der DNA-Replikation und zur Signalübertragung in der DNA-Schadensantwort bei. Veränderte H1-Stöchiometrie und H1E-assoziierte Chromatinzustände werden im Kontext epigenetischer Reprogrammierung, Differenzierung und Genomstabilität untersucht – Prozesse, die in Krebs und neuroentwicklungsbedingten Störungen häufig gestört sind. Als architektonisches Chromatinprotein ist H1E zudem relevant für Untersuchungen zu Replikationsstress, Heterochromatinbildung und der genomweiten Belegung durch Transkriptionsfaktoren.

Histone cluster 1 H1E Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HIST1H1E-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Histone cluster 1 H1E Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HIST1H1E-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HIST1H1E-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Histone cluster 1 H1E-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HIST1H1E-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Histone cluster 1 H1E-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Histone cluster 1 H1E-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HIST1H1E-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.