Plasmide CRISPR d'Activation (h) Histatin 1: sc-416632-ACT

HTN1 code l’histatine 1, un peptide riche en histidine sécrété par les glandes salivaires, qui contribue à la défense innée et à l’homéostasie des muqueuses dans la cavité buccale. L’histatine 1 participe aux processus antimicrobiens et soutient le maintien de la barrière épithéliale, influençant la dynamique des biofilms et les interactions hôte–microbe à l’interface salive–muqueuse. Par ses effets sur la croissance microbienne, l’adhésion et le tonus inflammatoire local, HTN1 est pertinent pour les études sur la régulation du microbiome oral et les réponses au stress dans les cellules épithéliales et glandulaires. Une composition altérée des peptides salivaires, y compris des membres de la famille des histatines, est fréquemment étudiée dans les affections touchant la santé buccale et la fonction des glandes, ce qui motive des recherches mécanistiques sur la régulation de HTN1.

Histatin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HTN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Histatin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HTN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HTN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Histatin 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HTN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Histatin 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Histatin 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HTN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.