Plasmide CRISPR/Cas9 KO Histamine H4 Receptor (h): sc-402430

Présentation

HRH4 code le récepteur H4 de l’histamine (H4R), un RCPG couplé à Gi/o principalement exprimé dans les compartiments hématopoïétiques et des cellules immunitaires, où il détecte l’histamine afin de réguler la chimiotaxie, la libération de cytokines et la signalisation dépendante du calcium. L’activation du récepteur inhibe l’activité de l’adénylate cyclase, module les niveaux d’AMPc et s’interface avec les réseaux de signalisation associés aux voies MAPK et PI3K, qui influencent la migration des leucocytes et le tonus inflammatoire. L’activité de HRH4 contribue au trafic des cellules immunitaires et à l’inflammation associée aux barrières, reliant la signalisation histaminergique aux processus allergiques et inflammatoires. Une signalisation H4R dérégulée a été étudiée dans des contextes tels que l’asthme, la dermatite, le prurit et, plus largement, des pathologies à médiation immunitaire, où l’on évalue fréquemment les modifications des réponses aux chimiokines et du recrutement leucocytaire dépendantes du récepteur.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Histamine H4 Receptor (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HRH4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HRH4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HRH4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Histamine H4 Receptor.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HRH4 pour l'étude de la signalisation de Histamine H4 Receptor, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HRH4 essentiels à la fonction de Histamine H4 Receptor
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HRH4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Histamine H4 Receptor plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Histamine H4 Receptor plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HRH4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Histamine H4 Receptor plasmide HDR (h) et le Histamine H4 Receptor (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HRH4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HRH4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.