Plasmide CRISPR d'Activation (h) Histamine H4 Receptor: sc-402430-ACT

HRH4 code le récepteur H4 de l’histamine, un récepteur couplé aux protéines G principalement exprimé dans les cellules immunitaires et hématopoïétiques, où il détecte l’histamine et module la signalisation inflammatoire. L’activation de HRH4 se couple surtout aux voies Gi/o, entraînant une diminution de l’AMPc et modulant en aval les réponses dépendantes des voies MAPK, PI3K/AKT et du calcium, qui influencent la chimiotaxie, la production de cytokines et le trafic leucocytaire. Par ces mécanismes, HRH4 contribue à la régulation de l’inflammation allergique et, plus largement, à l’homéostasie immunitaire dans des tissus tels que la peau, le poumon et le tractus gastro-intestinal. Des altérations de l’expression ou de la signalisation de HRH4 ont été étudiées dans des affections inflammatoires chroniques et des phénotypes de maladies associées à l’immunité, ce qui étaye son intérêt en tant que nœud mécanistique pour la recherche en immunologie.

Histamine H4 Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HRH4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Histamine H4 Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HRH4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HRH4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Histamine H4 Receptor. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HRH4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Histamine H4 Receptor au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Histamine H4 Receptor dans les cellules tumorales présentant une expression de HRH4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.