Histamine H4 Receptor Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402430-ACT

O HRH4 codifica o recetor H4 da histamina, um recetor acoplado à proteína G expresso predominantemente em células imunitárias e hematopoiéticas, onde deteta a histamina e molda a sinalização inflamatória. A ativação do HRH4 acopla-se principalmente a vias Gi/o para reduzir o cAMP e modular respostas a jusante dependentes de MAPK, PI3K/AKT e cálcio, que influenciam a quimiotaxia, a produção de citocinas e o tráfego de leucócitos. Por meio destes processos, o HRH4 contribui para a regulação da inflamação alérgica e para uma homeostase imunitária mais ampla em tecidos como a pele, o pulmão e o trato gastrointestinal. Alterações na expressão ou na sinalização do HRH4 têm sido investigadas em condições inflamatórias crónicas e em fenótipos de doenças associadas ao sistema imunitário, sustentando a sua utilidade como um nó mecanístico na investigação em imunologia.

Histamine H4 Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HRH4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Histamine H4 Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HRH4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HRH4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Histamine H4 Receptor. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HRH4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Histamine H4 Receptor no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Histamine H4 Receptor em células tumorais com expressão de HRH4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.