Plasmide Double Nickase (h) Histamine H3 Receptor: sc-402473-NIC

HRH3 code le récepteur H3 de l’histamine, un RCPG couplé à Gi/o, fortement exprimé dans le système nerveux central, qui agit principalement comme autorécepteur et hétérocepteur présynaptique afin de réguler la libération des neurotransmetteurs. Lors de la liaison de l’histamine, la signalisation de HRH3 inhibe l’adénylyl cyclase, réduisant l’activité de la voie AMPc/PKA, et module la conductance des canaux ioniques ainsi que les voies MAPK/ERK en aval, influençant l’excitabilité neuronale et la plasticité synaptique. En contrôlant le tonus histaminergique et via des interactions avec les circuits dopaminergiques, cholinergiques et noradrénergiques, HRH3 contribue à la régulation veille–sommeil, à la cognition et à la neurobiologie de l’appétit. Des altérations de l’expression ou de la signalisation de HRH3 ont été étudiées dans le contexte des mécanismes des maladies neurologiques et neuropsychiatriques, ce qui étaye son intérêt comme cible pour des recherches au niveau des voies de signalisation et des circuits.

Histamine H3 Receptor Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HRH3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HRH3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HRH3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HRH3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.