Plasmide CRISPR d'Activation (h) HIRA: sc-404262-ACT

Le gène humain **HIRA** code une chaperonne d’histones qui s’associe à **ASF1A/ASF1B** pour déposer le variant d’histone **H3.3** de manière indépendante de la réplication de l’ADN, modulant ainsi l’accessibilité de la chromatine et des états transcriptionnels durables. L’incorporation de H3.3 dépendante de HIRA soutient la stabilité du génome, les réponses au stress de réplication, le remodelage de la chromatine associé à la sénescence, ainsi que la régulation appropriée des programmes géniques du développement et du cycle cellulaire. En influençant l’assemblage des nucléosomes au niveau des promoteurs, des enhancers et des sites de dommages à l’ADN, HIRA relie le maintien épigénétique aux voies qui contrôlent la différenciation, la prolifération et le vieillissement cellulaire. Une fonction ou une expression déréglée de HIRA a été associée à une organisation anormale de la chromatine et à des programmes transcriptionnels aberrants observés en oncologie et dans des contextes neurodéveloppementaux, ce qui en fait un point d’entrée utile pour des études mécanistiques en épigénétique.

HIRA Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HIRA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HIRA Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HIRA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HIRA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HIRA. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HIRA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HIRA au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HIRA dans les cellules tumorales présentant une expression de HIRA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.