Plasmide CRISPR/Cas9 KO HIPK3 (h): sc-406669

Présentation

La protéine kinase 3 interagissant avec le domaine homéobox (HIPK3) est une kinase sérine/thréonine qui intègre des signaux de stress et de développement en phosphorylant des régulateurs transcriptionnels, modelant ainsi des programmes d’expression génique liés aux décisions de destin cellulaire. HIPK3 a été impliquée dans la modulation de la signalisation apoptotique, des réponses aux dommages de l’ADN et des sorties transcriptionnelles associées aux voies TGF-β/BMP, via des interactions avec des protéines homéobox et d’autres facteurs nucléaires. Par ces fonctions, HIPK3 peut influencer la prolifération, la différenciation et la tolérance au stress cellulaire, des processus souvent perturbés en biologie du cancer et dans des contextes de remodelage tissulaire. Une activité ou une expression dérégulée de HIPK3 a également été associée à une signalisation inflammatoire altérée et à l’homéostasie métabolique, ce qui soutient son intérêt en tant que nœud mécanistique dans des études centrées sur les voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HIPK3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HIPK3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HIPK3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HIPK3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HIPK3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HIPK3 pour l'étude de la signalisation de HIPK3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HIPK3 essentiels à la fonction de HIPK3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HIPK3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HIPK3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HIPK3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HIPK3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HIPK3 plasmide HDR (h) et le HIPK3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HIPK3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HIPK3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.