Particules Lentivirales d'Activation (m) HIF1a: sc-420856-LAC

Le gène murin **Hif1a** code le facteur induit par l’hypoxie 1 alpha (HIF1a), un facteur de transcription bHLH-PAS qui se stabilise lorsque l’oxygène est faible et dimérise avec ARNT afin de coordonner l’adaptation cellulaire à l’hypoxie. HIF1a régule, via des éléments de réponse à l’hypoxie, des gènes impliqués dans le métabolisme glycolytique, la signalisation angiogénique, l’érythropoïèse, l’homéostasie du fer et la survie cellulaire, en intégrant des signaux provenant des voies PI3K–AKT–mTOR et MAPK. Son activité est contrôlée par l’hydroxylation des prolines et l’ubiquitination dépendante de VHL, reliant ainsi la détection de l’oxygène à la protéostasie. Une signalisation HIF1a dérégulée est largement impliquée dans la biologie tumorale liée à l’hypoxie, les réponses au stress associées à l’ischémie, l’inflammation chronique et le remodelage métabolique, ce qui en fait un nœud central pour les études mécanistiques des programmes transcriptionnels dépendants de l’oxygène.

Les particules d'activation lentivirales HIF1a (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Hif1a dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HIF1a (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Hif1a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HIF1a. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Hif1a ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.