HIF PHD3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403671

Descripción general

EGLN3 codifica la hidroxilasa de prolina 3 de HIF (PHD3), una dioxigenasa sensora de oxígeno que hidroxila las subunidades HIF-α de manera dependiente de oxígeno y de 2-oxoglutarato, promoviendo la ubiquitinación mediada por VHL y su degradación por el proteasoma. A través de esta vía canónica de hipoxia, PHD3 ayuda a ajustar programas transcripcionales que controlan la angiogénesis, el metabolismo glucolítico, la eritropoyesis y la supervivencia celular en respuesta a fluctuaciones en la tensión de oxígeno. La actividad de EGLN3 también se cruza con el metabolismo mitocondrial y la señalización de especies reactivas de oxígeno, vinculando el estado nutricional y la disponibilidad de oxígeno con la expresión génica adaptativa. La desregulación de la expresión o la función de EGLN3/PHD3 se ha asociado con respuestas hipóxicas alteradas en biología del cáncer, estrés celular relacionado con isquemia y contextos de tumores neuroendocrinos, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en la investigación de la hipoxia.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HIF PHD3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen EGLN3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del EGLN3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de EGLN3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HIF PHD3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en EGLN3 para la investigación de la señalización de HIF PHD3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de EGLN3 críticos para la función de HIF PHD3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de EGLN3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HIF PHD3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HIF PHD3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus EGLN3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HIF PHD3 (h) y el plásmido HDR HIF PHD3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología EGLN3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana EGLN3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.