Plasmide Double Nickase (h) HIF PHD2: sc-403334-NIC

EGLN1 code la prolyl‑hydroxylase 2 de HIF (PHD2), une dioxygénase senseur d’oxygène qui hydroxyle les sous‑unités HIF‑α dans une réaction dépendante du fer et du 2‑oxoglutarate. En conditions normoxiques, cette modification favorise l’ubiquitinylation médiée par VHL et la dégradation protéasomale de HIF‑α, limitant ainsi les programmes transcriptionnels qui contrôlent l’angiogenèse, le métabolisme glycolytique, l’érythropoïèse et la survie cellulaire. PHD2 intègre des signaux liés à la disponibilité en oxygène, au métabolisme mitochondrial et aux espèces réactives de l’oxygène afin d’ajuster la signalisation induite par l’hypoxie. Une activité dérégulée de la voie EGLN1/HIF a été associée à des troubles de l’homéostasie de l’oxygène et contribue à des phénotypes dépendants de l’hypoxie pertinents pour la biologie du cancer, des modèles d’ischémie et des microenvironnements inflammatoires.

HIF PHD2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EGLN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EGLN1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EGLN1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EGLN1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.