Plasmide Double Nickase (h) HIF PHD1: sc-402824-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HIF PHD1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HIF PHD1 Double Nickase (h) et le plasmide HIF PHD1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EGLN2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HIF PHD1 Antibody (2G3): sc-293220
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HIF PHD1 | sc-402824-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HIF PHD1 | sc-402824-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EGLN2 humain code la prolyl-hydroxylase 1 du facteur inductible par l’hypoxie (HIF PHD1), une dioxygénase dépendante du Fe(II) et du 2‑oxoglutarate, qui hydroxyle les sous-unités HIF‑α afin de favoriser leur ubiquitination médiée par VHL et leur dégradation par le protéasome en conditions normoxiques. En couplant la disponibilité en oxygène à des programmes transcriptionnels, PHD1 contribue à moduler les voies dépendantes de HIF qui contrôlent le métabolisme cellulaire, la signalisation angiogénique, l’érythropoïèse et les réponses adaptatives au stress. L’activité d’EGLN2 s’interface avec la fonction mitochondriale et l’équilibre rédox via le métabolisme du 2‑oxoglutarate, reliant la détection de l’oxygène à une régulation métabolique plus large. Une dérégulation de la signalisation EGLN2/PHD1 a été impliquée dans des contextes de réponses à l’hypoxie altérées et de remodelage métabolique observés dans de multiples modèles pertinents pour les maladies, ce qui étaye des études mécanistiques de la régulation génique dépendante de l’oxygène.
HIF PHD1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EGLN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EGLN2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EGLN2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EGLN2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.