Plásmido Doble Nickase (h) HIF PHD1: sc-402824-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)HIF PHD1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HIF PHD1 (h) y el plásmido de doble nickasa HIF PHD1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a EGLN2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HIF PHD1 Anticuerpo (2G3): sc-293220
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) HIF PHD1 | sc-402824-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) HIF PHD1 | sc-402824-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **EGLN2** codifica la prolil hidroxilasa 1 del factor inducible por hipoxia (**HIF PHD1**), una dioxigenasa dependiente de **Fe(II)** y **2‑oxoglutarato** que hidroxila las subunidades **HIF‑α** para favorecer la ubiquitinación mediada por **VHL** y su degradación por el proteasoma en condiciones de normoxia. Al acoplar la disponibilidad de oxígeno a programas transcripcionales, PHD1 ayuda a ajustar las vías reguladas por HIF que controlan el metabolismo celular, la señalización angiogénica, la eritropoyesis y las respuestas adaptativas al estrés. La actividad de EGLN2 se relaciona con la función mitocondrial y el equilibrio redox a través del metabolismo del 2‑oxoglutarato, conectando la detección de oxígeno con una regulación metabólica más amplia. La desregulación de la señalización de EGLN2/PHD1 se ha implicado en contextos de respuestas hipóxicas alteradas y de remodelación metabólica observadas en múltiples modelos relevantes para enfermedades, lo que respalda estudios mecanísticos de la regulación génica dependiente de oxígeno.
HIF PHD1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EGLN2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EGLN2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EGLN2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EGLN2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.