Plasmide CRISPR d'Activation (h) Hhip: sc-403293-ACT

HHIP humain code la protéine interagissant avec Hedgehog (Hhip), une glycoprotéine associée à la membrane qui se lie aux ligands Hedgehog et atténue la signalisation de la voie en limitant la disponibilité des ligands pour PTCH1/SMO. En tant que régulateur négatif de l’activité Hedgehog, HHIP contribue à ajuster les programmes de structuration du développement et l’homéostasie des tissus adultes, influençant des processus tels que la différenciation épithéliale, la signalisation stroma‑épithélium et la prolifération cellulaire. Une expression dérégulée de HHIP ou une altération de l’équilibre de la voie Hedgehog a été associée à des phénotypes pertinents pour les maladies en oncologie et en biologie des maladies pulmonaires chroniques, notamment via des effets sur le remodelage des voies aériennes et les réseaux de signalisation associés aux tumeurs. En tant que modulateur de voie, HHIP est fréquemment étudié dans des contextes où les programmes transcriptionnels induits par Hedgehog s’entrecroisent avec les voies WNT, TGF‑β et les signalisations inflammatoires.

Hhip Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HHIP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Hhip Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HHIP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HHIP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Hhip. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HHIP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Hhip au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Hhip dans les cellules tumorales présentant une expression de HHIP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.