Plásmido Doble Nickase (h) HGK: sc-403395-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)HGK consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HGK (h) y el plásmido de doble nickasa HGK (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a MAP4K4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HGK Anticuerpo (5-12): sc-100445
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) HGK | sc-403395-NIC | 20 µg | $410.00 |
MAP4K4 codifica la quinasa de serina/treonina HGK, un regulador aguas arriba de la señalización sensible al estrés que conecta señales próximas a la membrana con las cascadas de MAPK, incluidas las vías de JNK y p38. HGK contribuye a la remodelación del citoesqueleto, la migración celular, la señalización inflamatoria y la regulación metabólica mediante la modulación de redes de quinasas y nodos de señalización dependientes de adaptadores. En células humanas, la actividad alterada de MAP4K4 se ha asociado con cambios en la señalización de la insulina, el comportamiento de células endoteliales e inmunitarias y efectos dependientes del contexto sobre la proliferación y la invasión. Estas propiedades hacen de MAP4K4/HGK una diana útil para desentrañar la conectividad de vías impulsadas por quinasas y para cartografiar dependencias de señalización en modelos celulares relevantes para enfermedades.
HGK El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MAP4K4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MAP4K4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MAP4K4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MAP4K4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.