Plasmide Double Nickase (h) HEXIM1: sc-402333-NIC

HEXIM1 (hexamethylene bis-acetamide inducible 1) code un régulateur nucléaire de l’élongation transcriptionnelle qui module l’activité de P-TEFb via le complexe snRNP 7SK, influençant la levée de la pause de l’ARN polymérase II et les programmes d’expression génique. En se liant à CDK9/Cycline T et en les inhibant, HEXIM1 contribue au contrôle de la progression du cycle cellulaire, de la différenciation et des réseaux transcriptionnels répondant au stress. Une expression ou une régulation altérée de HEXIM1 a été associée à une dérégulation du contrôle transcriptionnel en cancérologie et a également été étudiée dans des contextes de signalisation hormonale et de remodelage cardiaque. En tant que facteur nodal du contrôle de l’élongation, HEXIM1 est fréquemment étudié afin de disséquer les effets, à l’échelle des voies, sur la transcription, les processus associés à la chromatine et les phénotypes en aval.

HEXIM1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HEXIM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HEXIM1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HEXIM1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HEXIM1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.