Plasmide CRISPR d'Activation (h) HEXIM1: sc-402333-ACT

HEXIM1 humain (hexaméthylène bis‑acétamide inducible 1) code une protéine régulatrice nucléaire qui freine l’élongation transcriptionnelle en séquestrant P‑TEFb (CDK9–Cycline T) au sein du complexe snRNP 7SK, limitant ainsi la phosphorylation du CTD de l’ARN polymérase II et la levée de la pause. En contrôlant l’élongation dépendante de CDK9, HEXIM1 influence des programmes d’expression génique sensibles aux stimuli, la progression du cycle cellulaire et des réseaux transcriptionnels associés à la différenciation. Une expression altérée de HEXIM1 ou une perturbation de l’homéostasie 7SK/P‑TEFb a été liée à la dérégulation transcriptionnelle observée dans des contextes de prolifération et d’adaptation au stress, faisant de HEXIM1 un nœud utile pour étudier les mécanismes qui couplent des signaux d’entrée à la sortie transcriptionnelle à l’échelle du génome. L’étude de la fonction de HEXIM1 soutient la recherche sur le contrôle de la transcription, la régulation associée à la chromatine et des voies pertinentes pour les maladies, pilotées par une dynamique d’élongation anormale.

HEXIM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HEXIM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HEXIM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HEXIM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HEXIM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HEXIM1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HEXIM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HEXIM1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HEXIM1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HEXIM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.