Plasmide CRISPR/Cas9 KO Hex (m): sc-420852

Présentation

Hhex (Hex) est un facteur de transcription à homéoboîte qui régule la mise en place des patrons précoces de l’embryon et l’organogenèse, avec des fonctions marquées dans la spécification de l’endoderme antérieur ainsi que dans le développement des lignées du foie, du pancréas et de la thyroïde chez la souris. En se liant à l’ADN via son homéodomaine, Hex intègre des signaux de développement pour piloter des programmes d’expression génique qui influencent les décisions de destin cellulaire, la morphogenèse et la différenciation tissulaire. L’activité de Hhex recoupe des voies qui gouvernent le développement endodermique et vasculaire et a été associée à la régulation de réseaux géniques hématopoïétiques et endothéliaux. Une expression ou une fonction de Hhex dérégulée est liée à des anomalies du développement et a été impliquée dans des états de différenciation altérés pertinents pour la biologie du cancer et des modèles de maladies hématologiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Hex (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hhex dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hhex, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hhex à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Hex.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hhex pour l'étude de la signalisation de Hex, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hhex essentiels à la fonction de Hex
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hhex pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Hex plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Hex plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hhex. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Hex plasmide HDR (m) et le Hex (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hhex pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hhex définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.