Plasmide CRISPR d'Activation (h) HES6: sc-404146-ACT

HES6 (hairy and enhancer of split 6) code un régulateur transcriptionnel de type hélice-boucle-hélice basique (bHLH) qui module les sorties de la voie Notch et influence l’engagement de lignée au cours du développement. Dans les cellules humaines, HES6 peut antagoniser la répression médiée par HES1 et interagir avec des programmes transcriptionnels neurogéniques et myogéniques afin de façonner les états de différenciation et de prolifération. Une expression dérégulée de HES6 a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et sert d’outil mécanistique pour étudier le remaniement transcriptionnel, la plasticité cellulaire et le contrôle du destin cellulaire dépendant du contexte. Ces caractéristiques font de HES6 un nœud utile pour l’exploration des réseaux de régulation génique en aval des signalisations Notch et bHLH.

HES6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HES6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HES6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HES6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HES6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HES6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HES6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HES6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HES6 dans les cellules tumorales présentant une expression de HES6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.