HES3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406281

概要

HES3（hairy and enhancer of split 3）は、塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型の転写抑制因子であり、Notchシグナル伝達の下流で機能して、細胞運命決定を制御する遺伝子発現プログラムを調節します。発生経路からのシグナルを統合しつつ、神経系前駆因子（proneural）や分化関連転写因子に拮抗することで、未分化状態の維持や系譜コミットメントの制御に寄与します。ヒト細胞では、HESファミリー活性の変化が、分化制御の破綻、異常増殖、疾患関連状況における幹細胞様表現型と関連づけられており、HES3は発生プログラムにおける転写制御を研究するうえで有用な結節点（ノード）となります。神経発生および前駆細胞関連の遺伝子ネットワークにおける役割は、シグナルから転写への連関やエピジェネティック制御の解明に向けた研究を後押しします。

HES3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHES3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HES3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HES3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HES3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HES3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HES3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HES3の機能に不可欠なHES3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HES3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HES3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHES3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HES3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HES3 HDRプラスミド（h）および HES3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHES3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHES3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。