Plasmide CRISPR/Cas9 KO HES2 (h): sc-407494

Présentation

HES2 code un répresseur transcriptionnel de type hélice-boucle-hélice (bHLH) de la famille Hairy/Enhancer-of-split, qui module des programmes d’expression génique contrôlant les décisions de destinée cellulaire. En tant qu’effecteur en aval de la signalisation Notch, HES2 contribue à des réseaux de rétrocontrôle transcriptionnel qui freinent la différenciation et aident à coordonner le timing du développement, agissant fréquemment via une répression liée aux promoteurs et par interaction avec des complexes corépresseurs. En influençant l’engagement de lignée et l’équilibre prolifération–différenciation, une activité altérée de HES2 est pertinente pour l’étude des troubles du développement et de la dérégulation, associée au cancer, des circuits transcriptionnels dépendants de Notch. In vitro, la perturbation de HES2 est couramment utilisée pour explorer le contrôle transcriptionnel du maintien des progéniteurs, les programmes neurogéniques et des issues de différenciation spécifiques au contexte.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HES2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HES2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HES2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HES2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HES2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HES2 pour l'étude de la signalisation de HES2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HES2 essentiels à la fonction de HES2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HES2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HES2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HES2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HES2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HES2 plasmide HDR (h) et le HES2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HES2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HES2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.