Plasmide Double Nickase (h) HES1: sc-400387-NIC

HES1 code un répresseur transcriptionnel de type hélice-boucle-hélice basique (bHLH) qui agit comme un effecteur canonique en aval de la signalisation Notch, où il atténue des programmes transcriptionnels spécifiques de lignée afin de maintenir des états progéniteurs. En se liant à des motifs N-box/E-box et en recrutant des complexes corépresseurs, HES1 contribue à coordonner le contrôle du cycle cellulaire, le calendrier de différenciation et l'organisation des tissus dans des contextes neuraux, endocriniens et hématopoïétiques. L'activité de HES1 s'intègre à des voies telles que Wnt, Hedgehog et TGF-β pour ajuster les décisions de destinée cellulaire et la dynamique transcriptionnelle oscillatoire au cours du développement. Une expression dérégulée de HES1 ou une activité anormale de l'axe Notch–HES1 a été associée à des programmes aberrants de différenciation et de prolifération observés dans plusieurs modèles pertinents pour la maladie, notamment dans des troubles du développement et des contextes de signalisation oncogénique.

HES1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HES1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HES1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HES1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HES1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.