Plasmide CRISPR d'Activation (h) Hepsin: sc-405081-ACT

Le gène humain **HPN** code l’hepsine, une sérine protéase transmembranaire de type II localisée à la surface cellulaire, où elle régule la protéolyse péricellulaire et le remodelage de la matrice extracellulaire. L’hepsine participe à une signalisation dépendante des protéases en clivant des substrats capables de moduler la disponibilité des facteurs de croissance, l’adhérence cellulaire et le comportement invasif, ce qui la relie aux voies impliquées dans l’organisation épithéliale et l’homéostasie tissulaire. Une expression dérégulée de **HPN** a été associée à des altérations de la différenciation épithéliale et à des programmes protéolytiques liés aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier les mécanismes de migration cellulaire, l’intégrité de la barrière et les interactions croisées avec le microenvironnement. En tant que protéase ancrée à la membrane, l’hepsine est également utile pour explorer les réseaux de protéases et les réponses transcriptionnelles en aval déclenchées par la protéolyse de surface.

Hepsin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HPN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Hepsin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HPN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HPN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Hepsin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HPN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Hepsin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Hepsin dans les cellules tumorales présentant une expression de HPN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.