HepaCAM Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406036

Descripción general

HEPACAM codifica HepaCAM, una molécula de adhesión celular tipo inmunoglobulina enriquecida en la membrana plasmática que favorece las interacciones célula–célula y la organización del tejido epitelial. HepaCAM contribuye a la inhibición por contacto, a la modulación de la morfología celular y a la regulación de la dinámica del citoesqueleto mediante redes de señalización asociadas a la adhesión que influyen en la migración y la proliferación. La alteración de la expresión o la función de HEPACAM se ha vinculado con un control del crecimiento desregulado y un comportamiento invasivo en múltiples contextos tumorales, en consonancia con su papel en el mantenimiento de estados celulares diferenciados. Estas propiedades hacen de HEPACAM un nodo útil para investigar la señalización dependiente de la adhesión, la estabilidad de las uniones y los fenotipos asociados con la plasticidad celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HepaCAM (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HEPACAM en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HEPACAM junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HEPACAM tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HepaCAM.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HEPACAM para la investigación de la señalización de HepaCAM, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HEPACAM críticos para la función de HepaCAM
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HEPACAM para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HepaCAM CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HepaCAM CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HEPACAM. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HepaCAM (h) y el plásmido HDR HepaCAM (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HEPACAM para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HEPACAM definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.