Plásmido Doble Nickase (h) Hemoglobin δ: sc-401567-NIC

HBD codifica la subunidad delta de la hemoglobina (hemoglobina δ), una proteína de transporte de oxígeno que contiene hemo y que se ensambla con la alfa‑globina para formar la hemoglobina A2 en células eritroides. Su expresión está estrechamente acoplada a los programas de eritropoyesis y biosíntesis de hemo, integrándose con la regulación de los genes de globina en el locus de la β‑globina y con las vías de maduración de los glóbulos rojos. Las variaciones en HBD y en su contexto regulatorio pueden influir en la composición de la hemoglobina y se estudian junto con los genes de globina tipo β en trastornos que afectan el equilibrio de hemoglobina y la fisiología de los eritrocitos. Como marcador dentro del clúster de globinas, HBD también es útil para investigar el control del locus, el cambio de expresión durante el desarrollo y la regulación transcripcional en modelos de diferenciación hematopoyética.

Hemoglobin δ El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HBD en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HBD. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HBD. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HBD alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.