Plasmide CRISPR d'Activation (h) Hemoglobin δ: sc-401567-ACT

HBD code la chaîne de globine delta de l’hémoglobine humaine, un composant essentiel de l’hémoglobine adulte A2 qui contribue au transport de l’oxygène par les érythrocytes et à l’homéostasie rédox. L’expression de la globine delta est étroitement couplée aux programmes de différenciation érythroïde et à la transcription médiée par la région de contrôle du locus des globines, en s’intégrant aux voies de biosynthèse de l’hème, de gestion du fer et d’assemblage de l’hémoglobine. Les variations d’expression ou de séquence de HBD peuvent influencer la composition de l’hémoglobine et servent de lecture moléculaire dans les études sur le switch des globines et l’érythropoïèse. Un déséquilibre des chaînes de globine est pertinent dans les hémoglobinopathies héréditaires, où les variations compensatoires des fractions mineures d’hémoglobine sont fréquemment étudiées comme modificateurs de la biologie de la maladie.

Hemoglobin δ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HBD sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Hemoglobin δ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HBD dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HBD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Hemoglobin δ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HBD natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Hemoglobin δ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Hemoglobin δ dans les cellules tumorales présentant une expression de HBD silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.