Plásmido Doble Nickase (h) Heme Oxygenase 2: sc-402580-NIC

HMOX2 codifica la hemo oxigenasa 2 (HO-2), una enzima asociada al RE y expresada de forma constitutiva que cataliza la degradación del hemo a biliverdina, hierro libre y monóxido de carbono. Mediante la regulación del hemo intracelular y del equilibrio redox, HO-2 contribuye a la citoprotección, la función mitocondrial y la homeostasis del hierro, conectándose con las respuestas al estrés oxidativo y la señalización inflamatoria. La actividad de HO-2 influye en el tono vascular y la señalización neuronal a través de la producción endógena de CO, vinculando a HMOX2 con vías relevantes para la neurobiología y el estrés cardiometabólico. La desregulación del manejo del hemo y los mecanismos de lesión oxidativa implican a HMOX2 en estudios sobre neurodegeneración, modelos de lesión por isquemia-reperfusión y daño tisular inflamatorio, sin que ello implique resultados clínicos.

Heme Oxygenase 2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HMOX2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HMOX2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HMOX2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HMOX2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.