Plasmide CRISPR/Cas9 KO Heme Oxygenase 2 (m): sc-420883

Présentation

Hmox2 code l’hème oxygénase 2 (HO-2), une enzyme constitutivement exprimée, associée au réticulum endoplasmique, qui catalyse la dégradation de l’hème en biliverdine, fer libre et monoxyde de carbone. En régulant la disponibilité cellulaire de l’hème et en générant des métabolites redox-actifs, HO-2 influence les réponses au stress oxydatif, l’homéostasie du fer et la signalisation médiée par le monoxyde de carbone, susceptible de moduler le tonus vasculaire et l’activité neuronale. Dans les tissus de souris, Hmox2 est particulièrement présent dans le système nerveux et contribue à l’adaptation métabolique, à la protection contre la cytotoxicité médiée par l’hème et aux interactions (« crosstalk ») des voies de signalisation inflammatoires. Une dérégulation du renouvellement de l’hème et une activité altérée de HO-2 ont été impliquées dans des modèles de neuroinflammation, de stress ischémique et de physiologie cardiopulmonaire, faisant de Hmox2 une cible utile pour des études au niveau des voies portant sur le métabolisme de l’hème et la signalisation du stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Heme Oxygenase 2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hmox2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hmox2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hmox2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Heme Oxygenase 2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hmox2 pour l'étude de la signalisation de Heme Oxygenase 2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hmox2 essentiels à la fonction de Heme Oxygenase 2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hmox2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Heme Oxygenase 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Heme Oxygenase 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hmox2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Heme Oxygenase 2 plasmide HDR (m) et le Heme Oxygenase 2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hmox2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hmox2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.