Plasmide CRISPR d'Activation (h) HEL308: sc-404447-ACT

HELQ code l’hélicase d’ADN humaine HEL308, une hélicase SF2 dépendante de l’ATP qui aide à résoudre les intermédiaires de réplication de l’ADN bloqués et favorise la stabilité du génome en situation de stress réplicatif. HEL308 participe à des voies liées à la réparation de l’ADN et au traitement des fourches de réplication, y compris des mécanismes en interface avec la recombinaison homologue et le réseau de l’anémie de Fanconi pour la tolérance aux pontages interbrins. En soutenant une réplication fidèle de l’ADN et la signalisation de la réponse aux dommages, HELQ influence des issues cellulaires telles que l’activation des points de contrôle, l’intégrité chromosomique et la survie en conditions de stress génotoxique. Une altération de la fonction ou de l’expression de HELQ a été associée dans la littérature à des phénotypes d’instabilité génomique et à des contextes de susceptibilité pertinents pour la biologie du cancer et les troubles liés à la réparation de l’ADN.

HEL308 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HELQ sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HEL308 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HELQ dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HELQ, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HEL308. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HELQ natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HEL308 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HEL308 dans les cellules tumorales présentant une expression de HELQ silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.