Particules Lentivirales d'Activation (m) HE4: sc-426693-LAC

Wfdc2 code pour HE4, un inhibiteur de protéases sécrété contenant un domaine WAP (whey acidic protein), impliqué dans la différenciation épithéliale, la régulation des protéases extracellulaires et le remodelage du microenvironnement tissulaire local. Dans les systèmes murins, l’expression de HE4 est associée à la biologie de la barrière épithéliale et à des programmes dépendants du contexte inflammatoire qui façonnent l’adhérence cellule–cellule et la dynamique de la matrice extracellulaire. En modulant la protéolyse et des signaux activés par les protéases, HE4 peut influencer des processus tels que la migration, des comportements de type invasif in vitro et des états transcriptionnels sensibles au stress. Des altérations de la régulation de WFDC2/HE4 ont été utilisées comme corrélat moléculaire dans des travaux axés sur le cancer et l’inflammation, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques de la physiopathologie épithéliale.

Les particules d'activation lentivirales HE4 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Wfdc2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HE4 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Wfdc2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HE4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Wfdc2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.