Plasmide CRISPR d'Activation (h2) HDGFRP3: sc-416344-ACT-2

HDGFRP3 humain (hepatoma-derived growth factor–related protein 3) code une protéine nucléaire associée à la chromatine, impliquée dans la régulation de la transcription et de la dynamique de la chromatine via des interactions avec l’ADN et des partenaires se liant aux acides nucléiques. HDGFRP3 est associée à des processus tels que le contrôle du cycle cellulaire, la prolifération et la différenciation, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte de la régulation épigénétique et des programmes d’expression génique dans des cellules transformées. Une expression altérée de HDGFRP3 a été rapportée dans de nombreux types de cancers, ce qui étaye son utilisation comme marqueur moléculaire de lecture dans des études de voies axées sur l’oncologie, sans pour autant suggérer une utilité clinique. L’édition génétique de HDGFRP3 dans des modèles cellulaires humains permet une dissection mécanistique des réseaux de signalisation dépendants de la chromatine, la cartographie des cibles transcriptionnelles en aval par des approches RNA-seq et des essais basés sur la ChIP, ainsi que des criblages fonctionnels évaluant la croissance, les réponses au stress et la régulation du génome.

HDGFRP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HDGFRP3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HDGFRP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HDGFRP3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HDGFRP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HDGFRP3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HDGFRP3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HDGFRP3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HDGFRP3 dans les cellules tumorales présentant une expression de HDGFRP3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.