Plasmide CRISPR d'Activation (h) HDGF: sc-402859-ACT

Le facteur de croissance dérivé d’un hépatome humain (HDGF) est une protéine nucléaire se liant à l’héparine, qui agit comme régulateur mitogène et pro-survie dans de nombreux types cellulaires. HDGF contribue à des programmes de contrôle transcriptionnel liés à la progression du cycle cellulaire, aux processus associés à la chromatine et aux réponses au stress cellulaire, et il peut influencer des phénotypes migratoires et angiogéniques via des réseaux de signalisation sensibles aux facteurs de croissance. Une expression dérégulée de HDGF a été rapportée dans diverses malignités et est fréquemment évaluée pour son association avec la croissance tumorale, l’invasion et le remodelage du microenvironnement. Ces propriétés font de HDGF une cible utile pour des études mécanistiques de la prolifération, de la différenciation et des interactions entre voies oncogéniques dans des modèles cellulaires humains.

HDGF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HDGF sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HDGF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HDGF dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HDGF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HDGF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HDGF natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HDGF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HDGF dans les cellules tumorales présentant une expression de HDGF silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.