Plasmide CRISPR d'Activation (h) hDcp1a: sc-402543-ACT

DCP1A code pour hDcp1a, un composant central des corps de traitement cytoplasmiques (P-bodies), qui servent d’échafaudage au décapsidage des ARNm et à leur dégradation 5′→3′. hDcp1a coopère avec l’enzyme de décapsidage DCP2 et des activateurs du décapsidage afin de coordonner le renouvellement des ARNm, la répression de la traduction et le contrôle qualité des ARN, reliant les réponses au stress à des modifications dynamiques de l’expression génique. En régulant la stabilité des transcrits, DCP1A influence des voies telles que la dégradation des ARNm médiée par les codons non-sens (NMD), le silençage médié par les microARN et les interactions (crosstalk) entre granules de stress et P-bodies. Une dérégulation de la dégradation des ARNm et de la biologie des P-bodies a été associée à des altérations de la protéostasie et à des programmes de signalisation aberrants observés dans des contextes de recherche sur le cancer et les maladies neurodégénératives.

Dcp1a Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DCP1A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Dcp1a Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DCP1A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DCP1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Dcp1a. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DCP1A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Dcp1a au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Dcp1a dans les cellules tumorales présentant une expression de DCP1A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.