Plasmide CRISPR d'Activation (h) HDC: sc-403606-ACT

Le gène HDC humain code l’histidine décarboxylase, l’enzyme limitante qui convertit la L-histidine en histamine, une amine biogène qui module la signalisation inflammatoire et neuro-immune. L’histamine produite par les mastocytes, les basophiles et d’autres lignées myéloïdes exprimant HDC régule des voies dépendantes des GPCR (récepteurs H1 à H4), influençant la libération de cytokines, la perméabilité vasculaire et le trafic des leucocytes. L’activité de HDC contribue aussi à la régulation de la sécrétion acide gastrique via une signalisation paracrine et affecte la neurotransmission dans le système nerveux central. Une dérégulation de la biologie de l’histamine a été associée à l’inflammation allergique, à l’asthme et à d’autres affections à médiation immunitaire, faisant de HDC un nœud pertinent pour étudier l’immunité innée et la signalisation du microenvironnement tissulaire.

HDC Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HDC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HDC Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HDC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HDC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HDC. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HDC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HDC au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HDC dans les cellules tumorales présentant une expression de HDC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.