Plasmide Double Nickase (h) HCN3: sc-407361-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HCN3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HCN3 Double Nickase (h) et le plasmide HCN3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HCN3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HCN3 Antibody (TLL6C5): sc-58621
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HCN3 | sc-407361-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HCN3 | sc-407361-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HCN3 code un canal activé par l’hyperpolarisation et modulé par les nucléotides cycliques (HCN) qui contribue au courant Ih en conduisant un courant entrant mixte Na⁺/K⁺ lors de l’hyperpolarisation de la membrane. En combinant une dépendance au voltage avec une modulation par les nucléotides cycliques, HCN3 participe à la régulation du potentiel de membrane au repos, de l’excitabilité rythmique et de la sensibilité aux signaux neuromodulateurs dans des types cellulaires excitables. Ce canal intervient dans des processus électrophysiologiques liés à une activité de type pacemaker et aux schémas de décharge neuronale, et s’interface avec des voies dépendantes de l’AMPc qui ajustent la conductance membranaire. Des altérations de l’activité des canaux HCN ont été associées à des phénotypes d’excitabilité dérégulée pertinents pour la recherche sur les arythmies et les crises d’épilepsie, ce qui soutient des études mécanistiques de la fonction des canaux ioniques dans des modèles cellulaires pertinents pour la maladie.
HCN3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HCN3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HCN3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HCN3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HCN3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.