Plasmide CRISPR/Cas9 KO Hck (m): sc-420810

Présentation

Le gène murin **Hck** code la kinase des cellules hématopoïétiques (Hck), une tyrosine kinase non réceptrice de la famille Src, enrichie dans les lignées myéloïdes, qui couple les signaux des immunorécepteurs et des intégrines à des réseaux de phosphorylation en aval. Hck participe à des voies liées aux récepteurs Fc et aux récepteurs de type Toll (TLR) qui coordonnent le remodelage du cytosquelette, la phagocytose, la dégranulation et la production de médiateurs inflammatoires, en convergeant vers des nœuds tels que PI3K/AKT, MAPK et NF‑κB. Une activité altérée de Hck a été associée à une dérégulation de la signalisation de l’immunité innée et à un comportement myéloïde aberrant dans des contextes inflammatoires et des modèles de leucémie. En tant que kinase de signalisation proximale, Hck est largement utilisée pour explorer les mécanismes qui contrôlent l’activation, l’adhésion et la migration des macrophages et des neutrophiles.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Hck (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hck dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hck, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hck à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Hck.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hck pour l'étude de la signalisation de Hck, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hck essentiels à la fonction de Hck
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hck pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Hck plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Hck plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hck. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Hck plasmide HDR (m) et le Hck (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hck pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hck définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.