Plasmide CRISPR/Cas9 KO HCII (m): sc-420808

Présentation

Serpind1 code le cofacteur II de l’héparine (HCII), un inhibiteur de protéases à sérine qui inactive sélectivement la thrombine, avec une activité fortement augmentée par des glycosaminoglycanes tels que le sulfate de dermatane. En limitant la protéolyse de la thrombine, HCII module la coagulation et s’inscrit à l’interface de voies de signalisation dépendantes de la thrombine qui influencent l’activation plaquettaire, l’inflammation vasculaire et le remodelage de la matrice extracellulaire. Dans les systèmes murins, la fonction de Serpind1 est couramment étudiée dans le contexte de l’hémostase et de la biologie vasculaire, où une altération du contrôle de la thrombine peut affecter des phénotypes liés à la thrombose ainsi que des réponses inflammatoires. La dysrégulation de l’équilibre serpine–protéase est pertinente dans des modèles de mécanismes de maladies thrombo-inflammatoires et de réponses aux lésions vasculaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HCII (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Serpind1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Serpind1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Serpind1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HCII.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Serpind1 pour l'étude de la signalisation de HCII, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Serpind1 essentiels à la fonction de HCII
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Serpind1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HCII plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le HCII plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Serpind1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HCII plasmide HDR (m) et le HCII (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Serpind1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Serpind1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.