Plasmide CRISPR/Cas9 KO Hbb-bh1 (m): sc-420804

Présentation

Hbb-bh1 code une sous-unité de globine β‑like embryonnaire qui contribue à l’assemblage de l’hémoglobine et au transport de l’oxygène au cours du développement précoce de la souris. Son expression est régulée au cours du développement au sein du cluster de gènes de la β‑globine et coordonnée avec des programmes de différenciation érythroïde contrôlés par des régulateurs transcriptionnels et épigénétiques. Hbb-bh1 participe à l’équilibre hème–globine et à l’homéostasie rédox dans les érythrocytes primitifs, ce qui le relie à des voies influençant la maturation des érythrocytes et les réponses au stress oxydatif. La dérégulation du switching des gènes de globine et de la composition de l’hémoglobine est pertinente pour modéliser les hémoglobinopathies et étudier les mécanismes qui façonnent la spécification de la lignée érythroïde.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Hbb-bh1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hbb-bh1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hbb-bh1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hbb-bh1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Hbb-bh1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hbb-bh1 pour l'étude de la signalisation de Hbb-bh1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hbb-bh1 essentiels à la fonction de Hbb-bh1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hbb-bh1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Hbb-bh1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Hbb-bh1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hbb-bh1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Hbb-bh1 plasmide HDR (m) et le Hbb-bh1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hbb-bh1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hbb-bh1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.