Plasmide Double Nickase (h) HB-EGF: sc-400795-NIC

Le gène humain **HBEGF** code le facteur de croissance de type EGF liant l’héparine (**HB‑EGF**), un ligand ancré à la membrane qui peut être libéré par clivage protéolytique pour générer un facteur de croissance soluble. HB‑EGF signale principalement via les récepteurs de la famille **EGFR/ERBB** afin de réguler l’activité des voies **MAPK/ERK** et **PI3K–AKT**, influençant la prolifération, la survie et la migration cellulaires, ainsi que le remodelage associé à la cicatrisation. Son expression et le clivage de son ectodomaine sont étroitement liés aux signaux inflammatoires et de réponse au stress, ainsi qu’à l’activité de protéases de surface cellulaire médiée par les **ADAM**. Une dérégulation de la signalisation **HBEGF/EGFR** a été associée à des réponses épithéliales et vasculaires altérées dans des contextes tels que la fibrose, la biologie du cancer et le remodelage cardiovasculaire, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des programmes induits par les facteurs de croissance.

HB-EGF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HBEGF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HBEGF. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HBEGF. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HBEGF.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.