Plasmide CRISPR d'Activation (h) HAX-1: sc-402087-ACT

HAX1 code pour HAX-1, une protéine principalement associée aux mitochondries et au réticulum endoplasmique, qui régule l’apoptose, l’homéostasie du calcium et la dynamique du cytosquelette. Elle participe aux réponses au stress et aux signalisations de survie en modulant l’intégrité de la membrane mitochondriale et en interagissant avec des processus liés à la famille BCL-2, influençant l’activation des caspases et l’équilibre des espèces réactives de l’oxygène. HAX-1 contribue également au remodelage de l’actine et au trafic intracellulaire, ce qui la relie aux programmes de migration et d’adhésion cellulaires. Une dérégulation de l’expression ou de la fonction de HAX1 a été associée à une survie altérée des cellules hématopoïétiques, à l’homéostasie des cellules immunitaires et à la biologie tumorale, ce qui en fait une cible utile pour étudier les voies de survie et les décisions de destinée cellulaire.

HAX-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HAX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HAX-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HAX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HAX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HAX-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HAX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HAX-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HAX-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HAX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.