Plasmide CRISPR d'Activation (h) Haspin: sc-403076-ACT

GSG2 code la kinase sérine/thréonine Haspin, un régulateur de la mitose qui phosphoryle l’histone H3 sur Thr3 afin de créer une plateforme d’ancrage pour le complexe des passagers chromosomiques durant la prométaphase et la métaphase. Cette marque épigénétique favorise l’enrichissement centromérique de la signalisation d’Aurora B et contribue au bon alignement des chromosomes, à la dynamique de cohésion et à une ségrégation fidèle lors de la division cellulaire. En s’intégrant au contrôle du point de contrôle mitotique et à la signalisation dépendante de la chromatine, Haspin relie la phosphorylation des histones à la fonction des kinétochores et à l’organisation du fuseau mitotique. Une activité d’Haspin dérégulée a été associée à des phénotypes prolifératifs et à l’instabilité génomique, faisant de GSG2 un nœud pertinent pour étudier la régulation de la chromatine dépendante du cycle cellulaire dans des contextes liés au cancer.

Haspin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GSG2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Haspin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GSG2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GSG2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Haspin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GSG2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Haspin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Haspin dans les cellules tumorales présentant une expression de GSG2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.