Particules Lentivirales d'Activation (m) HAS2: sc-420798-LAC

Has2 chez la souris code l’hyaluronane synthase 2 (HAS2), une glycosyltransférase associée à la membrane qui polymérise l’hyaluronane à la membrane plasmique et contribue à l’assemblage de la matrice péricellulaire. La production d’hyaluronane induite par HAS2 influence le remodelage de la matrice extracellulaire, l’adhésion et la migration cellulaires, ainsi que la mécanotransduction via une signalisation dépendante de CD44 et de RHAMM, affectant des processus tels que la transition épithélio-mésenchymateuse et les réponses aux lésions. La régulation de Has2 s’articule avec les voies de signalisation du TGF-β, d’ERK/MAPK et de l’inflammation, qui ajustent le dépôt de matrice et l’architecture tissulaire. Les perturbations de la dynamique HAS2/hyaluronane sont fréquemment étudiées dans la fibrose, le remodelage vasculaire et la biologie du microenvironnement tumoral, en tant que déterminants de l’organisation du stroma et de la motilité cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales HAS2 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Has2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HAS2 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Has2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HAS2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Has2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.