Plasmide CRISPR d'Activation (m) HAS2: sc-420798-ACT

Le gène murin **Has2** code l’hyaluronane synthase 2 (HAS2), une enzyme de la membrane plasmique qui polymérise l’hyaluronane, un glycosaminoglycane majeur de la matrice extracellulaire. La production d’hyaluronane induite par HAS2 module l’organisation de la matrice péricellulaire, son hydratation et la mécanotransduction, influençant la migration, l’adhérence et la prolifération cellulaires via des interactions avec des récepteurs tels que CD44 et RHAMM. La régulation de **Has2** relie la morphogenèse du développement et le remodelage tissulaire à des réseaux de signalisation incluant le TGF-β, ERK/MAPK et des signaux inflammatoires qui remodèlent la dynamique de la matrice extracellulaire. Des altérations de l’activité de HAS2 et de l’abondance d’hyaluronane sont associées au remodelage fibrotique, à des pathologies vasculaires et à la biologie du microenvironnement tumoral, faisant de **Has2** un nœud pertinent pour l’étude de phénotypes dépendants de la matrice in vivo et dans des cellules murines en culture.

HAS2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Has2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HAS2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Has2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Has2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HAS2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Has2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HAS2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HAS2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Has2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.