Plasmide CRISPR/Cas9 KO HAO2 (h): sc-405855

Présentation

HAO2 (hydroxyacid oxidase 2) code une oxydase peroxysomale dépendante du FMN impliquée dans l’oxydation des acides gras 2‑hydroxylés, contribuant au catabolisme lipidique et à l’homéostasie rédox médiée par les peroxysomes. Par la génération de peroxyde d’hydrogène lors de l’oxydation des substrats, HAO2 s’inscrit dans les mécanismes cellulaires de contrôle du stress oxydatif et dans des voies d’adaptation métabolique liées à la fonction peroxysomale. Une expression modifiée de HAO2 a été associée à une reprogrammation métabolique dans la biologie hépatique et rapportée dans de multiples études transcriptomiques du carcinome hépatocellulaire, ce qui étaye son utilisation comme marqueur pour l’étude d’états métaboliques associés aux tumeurs. La perturbation ou la modulation de HAO2 est donc utile pour explorer le métabolisme lipidique peroxysomal, la gestion des espèces réactives de l’oxygène et les conséquences en aval sur la signalisation dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HAO2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HAO2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HAO2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HAO2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HAO2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HAO2 pour l'étude de la signalisation de HAO2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HAO2 essentiels à la fonction de HAO2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HAO2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HAO2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HAO2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HAO2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HAO2 plasmide HDR (h) et le HAO2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HAO2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HAO2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.