Plasmide Double Nickase (h) HAI-2: sc-407762-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HAI-2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HAI-2 Double Nickase (h) et le plasmide HAI-2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SPINT2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HAI-2 | sc-407762-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HAI-2 | sc-407762-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SPINT2 code l’inhibiteur 2 de l’activateur du facteur de croissance des hépatocytes (HAI‑2), un inhibiteur de sérine protéases de type Kunitz qui limite la protéolyse péricellulaire en régulant des protéases ancrées à la membrane telles que la matriptase (ST14) et des activateurs apparentés. En restreignant l’activation, dépendante des protéases, de substrats incluant le pro‑HGF ainsi que la signalisation MET en aval, HAI‑2 contribue au maintien de l’intégrité de la barrière épithéliale, de la polarité cellulaire et d’un remodelage contrôlé de la matrice extracellulaire. La fonction de SPINT2 est étroitement liée à des voies qui régissent l’homéostasie épithéliale, la signalisation activée par les protéases et les réponses inflammatoires, et sa dérégulation a été associée à un remodelage tissulaire aberrant ainsi qu’à des phénotypes d’invasion pertinents pour le cancer. Une expression altérée de SPINT2 ou des perturbations génétiques sont également impliquées dans des troubles épithéliaux congénitaux et alimentent les études mécanistiques sur l’équilibre protéase–inhibiteur dans les cellules humaines.
HAI-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SPINT2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SPINT2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SPINT2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SPINT2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.