Plasmide CRISPR/Cas9 KO HAI-1 (h): sc-404011

Présentation

SPINT1 code l’inhibiteur 1 de l’activateur du facteur de croissance des hépatocytes (HAI‑1), un inhibiteur de sérine‑protéases de type Kunitz ancré à la membrane, qui limite la protéolyse péricellulaire à la surface des épithéliums. HAI‑1 régule l’activité et la maturation de protéases telles que la matriptase (ST14) et l’hepsine, contribuant ainsi au remodelage de la matrice extracellulaire, à l’intégrité de la barrière épithéliale et aux cascades de signalisation des facteurs de croissance, dont la voie HGF/c‑MET. Par ces interactions, SPINT1 participe à l’homéostasie épithéliale, à la réparation tissulaire et au contrôle des programmes de motilité cellulaire et d’invasion. Un déséquilibre de l’axe SPINT1/HAI‑1 a été associé à des altérations des réseaux de protéases observées dans des pathologies épithéliales, notamment lors de lésions inflammatoires et du remodelage associé au cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HAI-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SPINT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SPINT1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SPINT1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HAI-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SPINT1 pour l'étude de la signalisation de HAI-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SPINT1 essentiels à la fonction de HAI-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SPINT1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HAI-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HAI-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SPINT1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HAI-1 plasmide HDR (h) et le HAI-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SPINT1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SPINT1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.