Plasmide CRISPR/Cas9 KO HADHA (m): sc-430176

Présentation

Hadha chez la souris code la sous-unité alpha de la protéine mitochondriale trifonctionnelle (HADHA), un complexe enzymatique clé de la β‑oxydation des acides gras à longue chaîne, qui catalyse les activités d’énoyl‑CoA hydratase et de 3‑hydroxyacyl‑CoA déshydrogénase. HADHA soutient le métabolisme énergétique mitochondrial en couplant le catabolisme des lipides à la production d’acétyl‑CoA et au flux en aval du cycle de l’acide tricarboxylique (cycle TCA), avec des effets étendus sur l’équilibre rédox et l’adaptation métabolique. L’altération de la fonction de HADHA est associée à une utilisation mitochondriale déficiente des acides gras et est pertinente dans le cadre d’erreurs innées du métabolisme touchant des tissus oxydatifs tels que le foie, le cœur et le muscle squelettique. Hadha est donc largement étudié dans des voies impliquées dans l’homéostasie mitochondriale, les réponses au stress nutritionnel et la signalisation induite par les lipides.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HADHA (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hadha dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hadha, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hadha à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HADHA.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hadha pour l'étude de la signalisation de HADHA, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hadha essentiels à la fonction de HADHA
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hadha pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HADHA plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le HADHA plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hadha. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HADHA plasmide HDR (m) et le HADHA (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hadha pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hadha définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.