Plasmide CRISPR/Cas9 KO H2-Q1 (m): sc-420774

Présentation

H2-Q1 code une molécule non classique du CMH de classe I (classe Ib) chez la souris, qui contribue à la présentation des antigènes et à la signalisation immunorégulatrice à la surface cellulaire. Comparée aux molécules H-2 classiques, H2-Q1 est souvent associée à une liaison peptidique spécialisée et à sa reconnaissance par certains sous-ensembles de lymphocytes T ainsi que par des récepteurs des cellules NK, influençant la surveillance immunitaire et la tolérance périphérique. Son expression et sa fonction croisent des voies qui contrôlent l’activation des lymphocytes, l’inflammation induite par les cytokines et l’homéostasie tissulaire médiée par le système immunitaire. La reconnaissance dépendante du CMH de classe I lorsqu’elle est dérégulée est fréquemment étudiée dans des contextes tels que l’auto-immunité, l’infection et l’immunologie des tumeurs, faisant de H2-Q1 un locus utile pour disséquer les mécanismes d’échappement immunitaire et d’immunopathologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO H2-Q1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène H2-Q1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du H2-Q1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert H2-Q1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine H2-Q1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en H2-Q1 pour l'étude de la signalisation de H2-Q1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de H2-Q1 essentiels à la fonction de H2-Q1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de H2-Q1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le H2-Q1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le H2-Q1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus H2-Q1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le H2-Q1 plasmide HDR (m) et le H2-Q1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie H2-Q1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles H2-Q1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.