Plasmide Double Nickase (h) H-Ras: sc-400204-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) H-Ras correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide H-Ras Double Nickase (h) et le plasmide H-Ras Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HRAS. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: H-Ras Antibody (M90): sc-53959
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) H-Ras | sc-400204-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) H-Ras | sc-400204-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HRAS code la petite GTPase humaine H-Ras, un commutateur moléculaire associé à la membrane qui alterne entre des états liés au GDP et au GTP afin de transmettre des signaux provenant des récepteurs à activité tyrosine kinase et d’autres entrées en amont. Une fois activée, H-Ras engage les voies de signalisation RAF–MEK–ERK et PI3K–AKT, intégrant des signaux qui régulent la prolifération, la différenciation, la dynamique du cytosquelette et la survie cellulaire. Un contrôle strict de l’hydrolyse du GTP par les GEF et les GAP est essentiel pour maintenir l’amplitude et la durée normales du signal, et la dérégulation de la signalisation RAS est fortement associée à la transformation oncogénique et à des programmes de croissance aberrants. HRAS est donc largement utilisé comme locus modèle pour disséquer la régulation de la voie MAPK, le contrôle par rétroaction et la sortie de signal dépendante du contexte dans les cellules humaines.
H-Ras Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HRAS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HRAS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HRAS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HRAS.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.