GW182 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400906

Descripción general

TNRC6A codifica GW182, un componente central de andamiaje del complejo de silenciamiento inducido por microARN que coordina la represión génica postranscripcional. GW182 se une a proteínas Argonauta y recluta los complejos deadenilasas CCR4–NOT y PAN2–PAN3, promoviendo la deadenilación del ARNm, el desencapuchado y la inhibición de la traducción en los cuerpos P citoplasmáticos. A través de estas interacciones, TNRC6A contribuye a configurar programas de expresión génica controlados por microARN que influyen en el control del ciclo celular, la diferenciación, las respuestas al estrés y la señalización inmunitaria innata. La desregulación de las redes de silenciamiento asociadas a GW182 se ha relacionado con una regulación aberrante del transcriptoma observada en múltiples contextos patológicos, incluidos el cáncer y los trastornos neurológicos, lo que convierte a TNRC6A en un nodo útil para estudios mecanísticos de biología del ARN.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GW182 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TNRC6A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TNRC6A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TNRC6A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GW182.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TNRC6A para la investigación de la señalización de GW182, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TNRC6A críticos para la función de GW182
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TNRC6A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GW182 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GW182 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TNRC6A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GW182 (h) y el plásmido HDR GW182 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TNRC6A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TNRC6A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.